③ 有效增强多肽保留，显著改善分离度。

② 同时 CF₃COO⁻可以竞争吸附在硅胶表面，屏蔽活性位点，极大减轻碱性多肽的吸附拖尾。

② 避免肽段电荷随 pH 波动，保证保留时间稳定，峰形重现。

4、改善峰形，压缩峰宽

② TFA 阴离子疏水性更强，离子对结合更牢固，能够收紧色谱峰，减少峰展宽，特别适合分子量较大的多肽。二、TFA常规使用浓度 0.1%（体积比）1. 对于大分子或强疏水性多肽，可将浓度提高至 0.5% 以提升样品溶解性或洗脱能力；

二、TFA常规使用浓度 0.1%（体积比）

1. 对于大分子或强疏水性多肽，可将浓度提高至 0.5% 以提升样品溶解性或洗脱能力；而分离胰蛋白酶酶解多肽时偶尔会选用更低浓度。

2. 分析大分子多肽或蛋白质时，若三氟乙酸浓度低于 0.1%，容易造成峰形变差；不过随着色谱填料的修饰与改进，现在可以大幅降低 TFA 使用浓度。

3. 在 200～220 nm 波长检测时，保持 TFA 浓度恒定的梯度洗脱程序，有时会出现基线漂移现象。

由于当流动相由水相逐步转变为有机相时，介电常数会发生变化，进而影响 π-π 电子相互作用，最终导致物质在 200～220 nm 区间的紫外吸收光谱发生改变，多数反相色谱分离过程中由此产生基线漂移。

为减弱甚至消除三氟乙酸紫外吸收带来的基线漂移，应尽可能将检测波长设置在 215 nm 附近；同时使 B 相中的 TFA 浓度比 A 相低约 15%，以此进行补偿。例如：A 相含0.1% TFA，B 相使用 0.085% TFA。三、多肽的分析与纯化中TFA优缺点

③ 挥发性强，后续真空冻干可以除去，减少多肽成品中杂质干扰。