乔尔达诺等人提出了“生物淘选及选择性相互作用配体的快速分析”(简称 BRASIL)这一新方法,用于高亲和力肽的筛选、选择和分选。该方法的创新之处在于增加了基于差速离心的细胞表面结合肽分选步骤。首先将细胞悬液与噬菌体在水相上层中孵育,然后通过不相溶的有机下层进行离心。乔尔达诺及其同事声称,这种单步有机相分离法比目前主要依赖多次洗涤步骤或有限稀释的方法更快,且灵敏度和特异性更高。以人脐静脉内皮细胞(HUVEC)作为筛选对象,他们从饥饿状态的 HUVEC 和血管内皮生长因子(VEGF)刺激后的 HUVEC 中分离出 21 个结合的噬菌体克隆。其中 14 个克隆(67%)在 VEGF 刺激后结合能力增强超过 150%(范围为 1.5 至 8.7 倍;中位数为 2.2 倍)。从所选噬菌体中随机选取 34 个克隆进行序列比对分析,结果显示通过 BRASIL 选择回收的噬菌体中有 24 个克隆(70%)具有可完美匹配血管内皮生长因子家族成员序列的肽基序。他们选取了两个肽(CPQPRPLC 和 CNIRRQGC)用于体外血管内皮生长因子受体-1(VEGFR - 1)的结合试验。其中一个被选中的肽 CPQPRPLC 磁珠与 VEGFR 的结合量比对照组高出 1000 多倍。
单字母 H2N-CPQPRPLC-OH
多字母 H2N-Cys-Pro-Gln-Pro-Arg-Pro-Leu-Cys-OH
氨基酸个数 8
分子式 C38H64N12O10S2
平均分子量(MW) 913.12