基质金属蛋白酶MMP-12 FRET substrate

描 述：高选择性 MMP-12 FRET 底物，kcat/Km 值为 1.85 · 10⁵ M⁻¹s⁻¹。除 MMP-13 (kcat/Km = 0.53 · 10 ⁵ M⁻¹s⁻¹) 和 MMP-9 (0.33 · 10⁵ M⁻¹s⁻¹) 外，其他 MMP 的底物较差。

Mca-Pro-Leu-Gly-Leu-Glu-Glu-Ala-Dap(Dnp)-NH2 是基质金属蛋白酶 12 (MMP12) 的高选择性底物，kcat/Km 值为 1.85*105 M-1s-1，对除 MMP13 (kcat/Km = 0.53*105 M-1s-1) 和 MMP9 (0.33*105 M-1s-1) 之外的其他 MMP 底物的特异性较差。

基于特异性光活化亲和探针从复杂蛋白质组中检测基质金属蛋白酶（MMP）活性形态的多种尝试迄今均未成功。为突破这一局限，本研究评估了一种替代光亲和策略的亲和力方法。

研究人员合成了两种能特异性结合MMPs活性位点的探针，通过生物素连接件实现MMP/探针复合物在磁珠上的分离。运用膦酸肽化学技术，研究人员制备出对多种MMPs具有皮摩尔级效力的亲和探针，以及含有光活化叠氮基团、对靶标具备亚纳摩尔级亲和力的光亲和探针。通过银染检测与MALDI肽质量指纹图谱联用，系统比较了两种策略在不同复杂度混合物中hMMP-12和hMMP-8的回收率与鉴定效率。

结果显示：就捕获MMPs的数量及MALDI-MS检测到的MMPs胰蛋白酶酶解片段数量而言，亲和方案优于光亲和策略。本研究开发的亲和捕获方案具有高度特异性和效率，当将10-36纳克MMPs（2、8、12型）添加至肿瘤提取物（10微克）时，通过单次亲和捕获实验即可实现MALDI-MS对三种hMMPs的快速、准确检测。因此，这些工具与方法将推动复杂蛋白质组中内源性活性MMPs的检测研究——这一目标具有重要的诊断应用价值。

参考文献：DOI: 10.1021/pr801069c